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产品简介: DNA退火缓冲液即DNA寡核苷酸退火缓冲液,是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液,可用于常规的DNA oligo的退火,尤其适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。该缓冲液能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接,转化后可以得到大量的阳性克隆。 本试剂操作简单,只需把待退火的DNA oligo和退火缓冲液按照一定比例混合后,置于PCR仪上进行程序降温,约90min即可完成。
使用方法(仅供参考): 1. 把待退火的DNA oligo用无酶水(例如:BL510A)配制成50uM,同时彻底溶解退火缓冲液(5×)备用。 2. 按如下反应体系操作: 步骤 组份 体积 1 无酶水 40μl 2 退火缓冲液(5×) 20μl 3 DNA oligo A (50μM) 20μl 4 DNA oligo B (50μM) 20μl Total 100μl 按照上述步骤,依次加入对应溶液并混匀,如果使用的PCR仪没有热盖设定,可加入Mineral Oil(矿物油)防止在后续反应中液体挥发,一般5-10ul即可。 3. 按如下设定PCR程序,进行退火: 步骤 温度 时间 作用 1 95℃ 2min Oligo充分变性 2 每90s下降1℃,降至25℃ 约90min 程序退火 3 4℃ - 保存 注:如果使用的PCR仪无法设定梯度降温功能,也可以选择在经过95℃,2min后,把管子拿出,自然冷却至室温。 4. 反应结束后产物可以直接用于后续实验,如需保存请放于-20℃。
注意事项: 1、 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。 2、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 保存条件: -20℃保存,有效期1年。 |
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